ibidi的傷口愈合系列產(chǎn)品，一直以來(lái)受到各個(gè)領(lǐng)域?qū)＜业囊恢潞迷u(píng)。在此我們收集了研究者的一些疑問(wèn)，今天我們就這些問(wèn)題進(jìn)行簡(jiǎn)答的解答。ibidi傷口愈合插件設(shè)計(jì)精巧，操作簡(jiǎn)單，標(biāo)準(zhǔn)化的數(shù)據(jù)分析方法恰恰彌補(bǔ)了傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法的不足。

　問(wèn)題一：要放多少細(xì)胞？

　經(jīng)常會(huì)有老師對(duì)放多少細(xì)胞產(chǎn)生疑問(wèn)，對(duì)于細(xì)胞量來(lái)說(shuō)，我們的目的是要在插件的培養(yǎng)孔里面形成單層的細(xì)胞。細(xì)胞密度既不能過(guò)低，也不能過(guò)高。以35mm培養(yǎng)皿為例，通常采用下面的步驟：

　1. 準(zhǔn)備5 x 105 cells/ml的細(xì)胞懸液.  105

　2. 每孔加入 70 µl / 100 µl細(xì)胞懸液 (2孔或3孔插件每孔種35,000個(gè)細(xì)胞，4孔傷口愈合插件每孔種55,000個(gè)細(xì)胞）。

　3. 37 °C孵育24小時(shí)。

　4. 用滅菌鑷子移除傷口愈合插件。

　5. 在35mm培養(yǎng)皿內(nèi)加入1ml新鮮培養(yǎng)基。

　6. 放于倒置顯微鏡載物臺(tái)上，以4X-20X物鏡采集初始圖片，并按實(shí)驗(yàn)節(jié)點(diǎn)設(shè)置在同一位置采集圖片。

　問(wèn)題二：插件尺寸多大？能放進(jìn)6/24孔板么？能產(chǎn)生的劃痕寬度是多少？

　Ibidi當(dāng)前有三種傷口愈合插件：2孔3孔和4孔插件，其中2孔和3孔插件單孔容積為70μl，尺寸分別為8.4 mm x 8.4 mm和 12.15 mm x 8.4 mm。單孔的細(xì)胞生長(zhǎng)面積均為0.22cm2。4孔的單孔容積為110μl，插件的直徑為17mm，每孔的生長(zhǎng)面積為0.35cm2，三種插件均能放入六孔板中，2孔傷口愈合插件也可放進(jìn)24孔板。所有的插件均能產(chǎn)生500μm的劃痕。此外，4孔插件除了能產(chǎn)生四個(gè)500μm的劃痕外，還包括一個(gè)1mm的中間劃痕。

　問(wèn)題三：只買(mǎi)插件能放在日常的培養(yǎng)耗材中么？對(duì)底部有什么要求？能用于蛋白包被過(guò)的表面么？自己放會(huì)不會(huì)漏液？

　傳統(tǒng)方法

　vs

　ibidi傷口愈合插件

　Ibidi的三種傷口愈合插件均有只提供單插件的包裝，需要研究人員自己準(zhǔn)備培養(yǎng)耗材。如果對(duì)成像無(wú)過(guò)高的要求，均可以使用日常的培養(yǎng)耗材，Ibidi插件采用硅膠材質(zhì)，底部為靜電吸附，無(wú)膠水，只需要底部是平整干凈即可。如果是蛋白包被的表面，則需要蛋白包被層完全干燥后，才能將插件放上面，插件不能貼在潮濕的表面，具體的包被建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)試一下。在放入插件后，可以用滅菌鑷子輕輕壓插件的四壁，確保插件與底部完全貼合。

　問(wèn)題四：ibidi插件能夠反復(fù)使用么？

　盡管ibidi插件的材質(zhì)可以濕熱滅菌并且對(duì)乙醇穩(wěn)定，但是，ibidi并不建議重復(fù)使用ibidi插件，由于是靜電吸附的原理，重復(fù)操作對(duì)底部的影響不可控。有可能會(huì)發(fā)生漏液等現(xiàn)象，影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。ibidi沒(méi)有重復(fù)使用的經(jīng)驗(yàn)，如果研究人員一定要重復(fù)使用，可能需要研究人員自己測(cè)試一下。

　問(wèn)題五：該如何采集圖片？需要采集同一培養(yǎng)皿的同一劃痕區(qū)域么？

　由于劃痕實(shí)驗(yàn)的本質(zhì)就是觀測(cè)細(xì)胞遷移的速率。一般情況下需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)幾個(gè)圖像采集實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)，之后盡量在同一區(qū)域采集圖像。比如下圖采集為0h，10h，16h，這樣獲得的結(jié)果對(duì)比一目了然。