1、Culture-Inserts插件可以重復使用嗎？

盡管 Culture-Inserts 插件中的材料可高壓滅菌并且與酒精相容，但我們不建議重復使用。 如果您仍想嘗試重復使用，則需要建立一個用酸或堿的清潔程序。 ibidi沒有任何清潔Culture-Inserts插件的經驗，雖然它們可能會保持粘性，但之前實驗的殘留可能會影響重現性。 

2、可否在蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件嗎？

可以，您可以在任何蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件。 到目前為止，還沒被報告與任何干燥表面不相容。 

3、是否可以使用 Culture-Insert 插件制作小于 500 µm 的傷口？

不可以，Culture-Inserts 插件中最小和標準的傷口尺寸是 500 µm。 Culture-Insert 4 Well /4孔插件會有一個額外的中心間隙，傷口大小為 1000 µm。

4、Culture-Insert 插件是如何固定在培養皿上的？

Culture-Insert 插件由生物相容的硅膠材料制成。 硅膠底部有一個粘性表面，可粘附（粘）在任何平坦、干燥、均勻的表面。 這種材料足夠柔軟可粘到表面上。 您可以用無菌鑷子按壓插件來簡單地修復它。

 5、您是否曾經遇到過 Culture-Inserts 插件無法粘附在定制涂層表面上的問題？

只要表面干燥，我們從未遇到過讓 Culture-Inserts 插件粘附在定制涂層表面上的任何問題。 但是，潮濕的表面會導致泄漏。 因此，請確保您的定制涂層表面完全干燥。

6、需要在 Culture-Insert 插件中播種多少個細胞才能進行細胞遷移實驗？

開始遷移實驗時，Culture-Insert 插件中的細胞層應融合。 在所有實驗中，匯合細胞層的密度應盡可能一致。 使用的接種細胞數量取決于您的細胞類型，因此您可以在 Culture-Insert 2 Well 說明書中找到推薦的范圍和詳細方案。 

7、為什么移除 ibidi Culture-Insert 插件后細胞有時會從蓋玻片上脫落？

以下是解釋細胞脫離的一些可能原因：

• 細胞密度太高。 --> 播種更少的細胞（細胞層應在 24 小時后生長至 100% 融合，但不能過度生長）。有關傷口愈合試驗的詳細方案，請參閱：傷口愈合／細胞劃痕實驗新方法－如何劃出筆直均一的劃痕

• 細胞正在挨餓。 --> 增加每個插入孔的培養基體積，或在細胞生長期間更換培養基。

• 在極少數情況下，細胞類型不能很好地粘附在 ibiTreat 表面。 --> 首先，覆蓋蓋玻片表面以促進細胞附著。然后，在插入 ibidi Culture-Insert 插件之前讓涂層干燥。

以下是使用帶有涂層的 ibidi Culture-Inserts 插件以促進細胞粘附的一些額外提示：

• 我們強烈建議提前測試移除ibidi Culture-Insert 插件是否會破壞遷移間隙中的涂層。這可以通過使用針對涂層蛋白的熒光標記抗體進行分析。如果遷移間隙區域中涂層的熒光信號與開放孔中的一樣均勻和強烈，則可以假設在插入物移除后是保持完好的。經過幾次成功的測試后進行實際實驗通常是安全的。

• 如果去除插入物破壞了大部分涂層，則僅涂覆插件的孔，然后接種細胞。取出插件后，通過向培養基中添加低濃度涂層來填充間隙并孵育約 30 分鐘。之后，用普通介質替換涂層溶液并繼續進行遷移實驗。

8、當 Culture-Insert變干燥時，包被蛋白會失去活性嗎？

這主要取決于與 Culture-Insert 插件一起使用的蛋白質類型。 使用層粘連蛋白的人通常更喜歡在涂層和細胞接種之間保持水分。 根據我們的經驗，當纖連蛋白和膠原蛋白 IV 干燥時，我們沒有發現對細胞遷移速度有任何影響。 

9、有沒有辦法用懸液細胞進行傷口愈合實驗，或者該實驗僅適用于貼壁細胞？

目前，使用 Culture-Insert插件的傷口愈合實驗只能用于貼壁細胞。 然而，單個細胞的遷移研究可以在 µ-Slide 趨化性中通過將細胞嵌入到3D基質（例如，I 型膠原蛋白凝膠）中進行。 

10、是什么使 Culture-Inserts插件在細胞接種過程中不會泄漏？

Culture-Insert 插件由硅膠材料制成。 上部是粗料，下部是非常柔軟的材料，在按下 Culture-Insert 插件后會固定在表面上。 正確插入時是不會有任何泄漏的。 

11、該如何存儲 Culture-Inserts插件？

請在室溫下儲存 Culture-Inserts。 打開過的產品應儲存在無菌容器中。 

12、有時很難在 Culture-Insert 插件中看到細胞層的匯合。 您有什么建議？

當使用相差顯微鏡和小孔時，例如 Culture-Insert 插件或 96 孔板，空氣-水界面之間的彎月面會導致表面強烈彎曲。 這會破壞除孔中心以外的任何地方的相位對比效應。

一種解決方案是用細胞培養基完全均勻地填充 Culture-Insert 的兩個孔。 通過這樣做，您可以在孔上方的介質和空氣之間創建一個平面。 請記住，這可能會導致兩孔之間的交叉污染。

13、有時，細胞傾向于聚集在 ibidi Culture-Insert插件的邊緣。 怎樣才能避免這種情況？

當細胞在 Culture-Insert插件中生長到非常高的密度時，會觀察到了這種情況。 為了減少細胞團塊，您應該在實驗開始時使用較低的細胞密度。 然而，有時細胞會粘在與細胞相容的硅膠上。 在這種情況下，我們建議較少孵育時間和/或細胞數量。 

14、Culture-Insert 如何在不造成細胞損傷的情況下模擬生理傷口？

使用體外實驗時，很難以可重復的方式模擬生理傷口。 當然，來自死細胞的碎片可能在與傷口愈合相關的遷移中發揮作用。 使用 Culture-Insert插件的 ibidi 傷口愈合實驗提供了可重復的、無損傷的細胞貼片。

在體內，各種其他參數對傷口愈合的影響更大，例如不同細胞類型的相互作用。 使用 Culture-Insert插件的體外 ibidi 傷口愈合實驗將遷移速度與所有這些其他影響分開，提供了一個客觀且可重復的實驗環境。

15、用Culture-Insert插件產生間隙時細胞是否會受損？

Culture-Insert 插件將細胞彼此分離，而不會產生傳統意義上的傷口（例如，在劃痕實驗期間）。 目的是在不產生大量受傷細胞的情況下產生間隙，然后研究間隙閉合。該技術使用戶能夠將細胞的遷移行為與細胞損傷區分開來。 

16、 Culture-Inserts 插件能否用于蛋白質涂層表面？ 拔出 Culture-Insert 插件會干擾涂層嗎？

一般來說，只要涂層干燥，Culture-Insert 產檢可以放置在涂層表面上。 請注意，插件不會黏附在潮濕的表面上。

但是，我們強烈建議您提前測試插件移除是否會破壞遷移間隙中的涂層。 您可以使用針對涂層蛋白的熒光標記抗體來分析這一點。 如果遷移間隙區域的涂層發出的熒光信號與開放孔中的一樣均勻和強烈，那么您可以假設在移除插件后涂層是保持完好的。 經過幾次成功的測試后進行實際實驗通常是安全的。