1.哪些特定應用使用µ-Slide VI ^0.1？

　　如果實驗中的細胞數量有限(例如當使用原代小鼠細胞時)，或者使用最少量的試劑做進行免疫熒光，建議使用µ-Slide VI ^0.1 。對于灌注實驗，µ-Slide VI ^0.1 會產生最高水平的剪切應力。

　　2. µ-Slide內的流型是Y型湍流嗎？

　　不是，當使用標準流速和水性介質時，在小通道中無法真正實現湍流特性。無量綱雷諾數(Re)用于表征不同的流型。層流發生在低雷諾數，而湍流發生在高雷諾數。表明管道和生物容器中層流的臨界雷諾數是Re=2000。雷諾數超過Re 4000，最有可能代表湍流。即使在 µ-Slide y-shaped中流速非常高（60毫升/分鐘），雷諾數仍非常低，約為Re=200，表明層流。

　　3.多大的剪切應力適合于滾動和粘附分析？

　　在滾動和粘附分析中，應該使用與內皮細胞層的標準流動調節相同的參數。有兩件事需要考慮: 首先，在進行滾動和粘附實驗之前，內皮細胞層應該進行幾天的流動調節。這個階段的剪切應力可能不同于在滾動和粘附期間施加的剪切應力。其次，在粘附試驗中，灌注培養基的速度也起作用。可能需要改變剪切應力。此外，有必要測試最佳流速/剪切應力。

　　4.為什么我的細胞在流動條件下沒有拉長？

　　內皮細胞的生理形狀在不同類型的血管中差異很大。并非所有類型的內皮細胞在其生理環境中都被拉長。

　　例如，HUVEC在血流的第一階段伸長。為了覆蓋整個表面，細胞通過在流動方向上伸長來增加它們的表面。在此流動期之后，細胞層生長成定向鵝卵石圖案，不再顯示顯著的伸長。

　　5.在進行分析之前，應該對細胞層施加多長時間的剪切應力？

　　細胞對機械剪切應力的適應性反應可長達數天。因此，根據您正在研究的標記，可能有必要在分析前對細胞層進行長達幾天的調節。我們建議在長期實驗中測試感興趣的參數，以確定最佳的測量時間點。

　　6.應該對內皮細胞施加多大的剪切力？

　　生理剪切應力取決于感興趣的組織和血管類型。根據文獻，人體內的生理剪切應力值在0至60dyn/cm²之間變化。在開始實驗之前，確定適用于所用細胞類型的相關剪切應力范圍至關重要。有關剪切應力對細胞影響的更多信息，請點擊查看這里（這是個鏈接2023-03-10發布的公眾號）。

　　7.如何增加流動分析中的細胞數量？

　　將通道載玻片串聯到一個灌流裝置/流體單元中，可以輕松地增加流式檢測中細胞的數量。應用說明書25（這是個鏈接2022-07-15發布的公眾號）提供了連接多個通道載玻片到一個流體單元的詳細方案。 此外，將細胞播種到通道底部和頂部，也可以增加通道中的細胞數量。

　　8.在開始流動之前，細胞應該附著多久？

　　在流動開始之前，細胞必須緊密附著在通道載玻片底部。附著時間取決于細胞類型、培養基添加物和表面。例如，在膠原涂層表面上使用HUVEC時，附著時間只需半小時。之后，就可以施加剪切應力。為了使細胞有機會適應新的環境條件，建議逐步增加剪切應力。關于HUVEC的詳細信息請參閱應用說明13（這是個鏈接2022-08-24發布的公眾號。 

　　9.硅珠如何再生？

　　將硅膠珠加熱即可輕松再生。請按照ibidi泵系統的說明書中的方案進行回收。

　　10.灌注裝置多久可以重復使用一次？

　　我們不建議重復使用灌注組件。每次實驗都使用一個新的灌注裝置，可獲得最可復制和最可靠的結果。您可以在ibidi泵系統說明書中找到有關滅菌和清潔的其他信息。 

　　11.如何確保細胞獲得孵化后的空氣？

　　ibidi泵系統的設置確保來自培養箱內部的具有正確CO2濃度的無菌空氣驅動灌注。有關詳細說明，請參見ibidi泵系統的說明書。 

　　12.如何計算通道載玻片中懸浮細胞的剪切應力？

　　在通道中通過液體時，壁面摩擦會導致流動速度呈拋物線形。通道中心的流速將比壁面快。剪切應力僅在通道或管道的壁面上發生。因此，只有附著在通道壁/底部的細胞才會經歷剪切應力。通道中央的懸浮細胞將經歷不同的流速，與靠近通道壁的細胞不同。因此，對于懸浮細胞，剪切速率是需要考慮的相關因素，而不是剪切應力。