在本應(yīng)用中，我們介紹了一個(gè)簡(jiǎn)單的方案，用于在ibidi的μ-Slide 8孔腔室載玻片中培養(yǎng)和染色貼壁細(xì)胞。在這個(gè)例子中，我們培養(yǎng)大鼠成纖維細(xì)胞，用多聚甲醛固定它們，用MitoTracker染色線粒體，并用DAPI復(fù)染細(xì)胞核。也可以使用所有常用的固定技術(shù)。此外，通過一抗和二抗染色，可以通過免疫細(xì)胞化學(xué)探測(cè)其他細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)。
µ-Slide 8 Well
該實(shí)驗(yàn)包括四個(gè)主要步驟:
在本示例中，我們使用了以下材料:
• Rat fibroblasts (cell line) 大鼠成纖維細(xì)胞（細(xì)胞株）
• μ-Slide 8 well, ibiTreat (ibidi, 80826) 八孔腔室載玻片，ibiTreat底部
• Paraformaldehyde (2% in PBS) 多聚甲醛
• Triton® X-100 (Fluka, 0.1%)
• Blocking solution (1% BSA in PBS） 封片劑
• MitoTracker Green (Life Technologies, 50 nM) 線粒體綠色熒光探針
• DAPI (Sigma, 0.1 μg/ml)
• 熒光顯微鏡（倒置），帶有適當(dāng)?shù)臑V光片組
免疫熒光實(shí)驗(yàn)方案對(duì)比: 傳統(tǒng)染色方案VS ibidi染色方案
使用任何一種ibidi免疫熒光染色方案比傳統(tǒng)方案要簡(jiǎn)便、快捷的多，無需在蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞可直接在ibidi載玻片上培養(yǎng)和染色。
應(yīng)用實(shí)例
原腸胚是小鼠胚胎干細(xì)胞的3D聚集體，就在軸延伸之前。它們?cè)?µ-Slide 8 孔上成像，并染色Sox2（藍(lán)色）、Brachyury（綠色）、Tbx6（紅色）和 LaminB1（灰色），突出顯示了這些轉(zhuǎn)錄因子在神經(jīng)中胚層祖細(xì)胞 (NMP) 中的空間排列和分化順序。將原腸胚國定在BABB中，并使用Leica LIGHTNING系統(tǒng)在配備40倍油鏡的Leica Sp8共聚焦顯微鏡上成像。圖片來自英國愛丁堡愛丁堡大學(xué)的Matthew French。
Jurkat T淋巴細(xì)胞（上）與抗原呈遞細(xì)胞（下，藍(lán)色）形成免疫突觸的共聚焦圖像。絲狀肌動(dòng)蛋白顯示為綠色。多囊泡體顯示為洋紅色。細(xì)胞在 µ-Slide 8 孔上成像。圖片來自西班牙馬德里IIBM、CSIC的Manuel Izquierdo。
MDCK細(xì)胞的熒光顯微鏡法。線粒體(MitoTracker，紅色)，肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架(Phalloidin，綠色)，細(xì)胞核(DAPI，藍(lán)色)。
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