管形成實(shí)驗(yàn)是一種簡(jiǎn)單但高效的的體外研究方法，用于篩選具有抗血管生成或促血管生成效果的物質(zhì)。這些效果可以通過(guò)不同的參數(shù)來(lái)衡量，例如管的長(zhǎng)度或凝膠表面上形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)數(shù)量。

　　要從管形成實(shí)驗(yàn)中得出高效的分析結(jié)果，需要在實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)后考慮幾個(gè)方面，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

　　本應(yīng)用提供了在收集管形成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)后進(jìn)行分析的指南，并專注于分析和解釋這些數(shù)據(jù)。為優(yōu)化您的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)閱讀應(yīng)用: Optimizing Tube Formation Assays優(yōu)化管形成實(shí)驗(yàn)。

　　ibidi為血管生成實(shí)驗(yàn)提供多種解決方案：

　　1、管形成和血管生成分析的輸出參數(shù)

　　“管”一詞描述的是在二維網(wǎng)狀中可見(jiàn)的細(xì)胞索，它 并不一定意味著這些細(xì)胞索有管腔。在管形成實(shí)驗(yàn)中，可以從相位對(duì)比圖像中確定四個(gè)關(guān)鍵參數(shù)，如下圖所示：• 細(xì)胞覆蓋面積[%] (藍(lán)色區(qū)域)• 管長(zhǎng)度[px] (紅色線條)• 分支點(diǎn)數(shù) (白色點(diǎn))• 環(huán)狀結(jié)構(gòu)數(shù)量 (黃色數(shù)字)這些關(guān)鍵參數(shù)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中彼此之間表現(xiàn)出一致的關(guān)系。因此，僅確定一個(gè)特征可能就足夠了：在本應(yīng)用說(shuō)明中，僅將管的長(zhǎng)度作為管形成的代表性值。

　　相位圖像（A）和分析圖像（B）顯示了管形成分析的關(guān)鍵特征：細(xì)胞覆蓋面積（藍(lán)色）、管（紅色）、環(huán)路（黃色）和分支點(diǎn)（白色）。根據(jù)這些參數(shù)，可以計(jì)算出其它值，如平均管長(zhǎng)、總管長(zhǎng)和環(huán)的平均面積。

　　從這些參數(shù)可以計(jì)算出更多的值，如平均管長(zhǎng)、總管長(zhǎng)度和環(huán)狀結(jié)構(gòu)的平均面積。

　　1.1、計(jì)算總管長(zhǎng)度

　　可以使用專用于管形成實(shí)驗(yàn)分析的各種軟件進(jìn)行圖像分析。

　　自動(dòng)化管形成分析的示例輸出示例

　　2、統(tǒng)計(jì)分析

　　血管形成是一個(gè)涉及各種各樣的生化反應(yīng)和信號(hào)通路復(fù)雜的過(guò)程。因此，建議每種處理?xiàng)l件至少使用三個(gè)生物學(xué)重復(fù)樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以獲得代表性值。

　　為了進(jìn)行可靠的分析并獲得平均值，我們推薦對(duì)每個(gè)條件進(jìn)行多孔分析和復(fù)制。例如，每個(gè)被分析的孔都會(huì)得出一個(gè)管長(zhǎng)值。這些值應(yīng)該針對(duì)每個(gè)條件進(jìn)行平均，并計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差。從同一載玻片上在相同條件下收集的數(shù)據(jù)點(diǎn)之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于10%。如果孔與孔之間的變化差異太大，則應(yīng)參考以下應(yīng)用指南來(lái)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件：Optimizing  Tube  Formation Assays。

　　以下圖表示例性地顯示了在兩種不同條件（Condition1與Condition2）下生長(zhǎng)在 Matrigel®基質(zhì)膠上的HUVEC細(xì)胞的總管長(zhǎng)。使用搭載于相差顯微鏡上的ibidi Stage Top Incubator進(jìn)行成像。對(duì)于每種條件，在四個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)（0h、4h、6h 及24h）分別對(duì)八個(gè)獨(dú)立的孔進(jìn)行了成像。

　　對(duì)兩種生物條件下，四個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)(0小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)和24小時(shí))的八個(gè)獨(dú)立孔的總管長(zhǎng)度進(jìn)行示例性數(shù)據(jù)分析。單個(gè)數(shù)據(jù)以點(diǎn)狀圖(左側(cè))和箱線圖（右側(cè)）的形式顯示。

　　這些單一數(shù)據(jù)點(diǎn)隨后被聚合并展示在一個(gè)箱線圖中。統(tǒng)計(jì)分析可以通過(guò)例如方差分析（ANOVA）或t檢驗(yàn)（Student’s t-test）來(lái)進(jìn)行，其中將不同條件的數(shù)據(jù)點(diǎn)相互測(cè)試。例如，t檢驗(yàn)（Student’s t-test）提供了證據(jù)，表明兩個(gè)獨(dú)立的、具有t分布值的數(shù)據(jù)集之間是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。